مطالعه مقاومت کینولونی وابسته به افلاکس پمپ در ایزوله های بالینی سودوموناس آئروجینوزا

عفونت¬های باکتریایی جزو عوامل اصلی مرگ و میر بویژه در جوامع در حال توسعه محسوب می¬شود. سودوموناس آئروژینوزا، عاملی عمده در بروز مرگ و میر در بیماران با ضعف سیستم ایمنی می¬باشد و مقاومت ذاتی به مواد ضد میکروبی سبب وخیم¬تر شدن وضعیت درمان عفونت¬های آن می¬شود. کینولون¬ها جزو بارزترین دسته مواد ضدمیکروبی سودوموناسی به شمار می¬رود. میکروارگانیسم با موتاسیون ژن¬های توپوایزومرازی و یا بیان بیشینه افلاکس چند دارویی، مقاومت کینولونی را بدست می آورد. هدف تحقیق بررسی نسخه برداری 4 سیستم افلاکس mexab-oprm, mexcd-oprj mexef-oprn و mexxy-oprm و تشخیص موتاسیون مقاومت کینولونی ژن-های توپوایزومرازی می¬باشد. پس از جمع آوری 133 ایزوله بالینی، الگوی مقاومتی 10 دیسک آنتی¬بیوتیکی سفتازیدیم، ایمی¬پنم، سیپروفلوکساسین، جنتامیسین، آمیکاسین، توبرامایسین، تیکارسیلین، پیپراسیلین، آزترونام و سفوتاکسیم از طریق دیسک دیفیوژن تعیین و حداقل غلظت مهارکننده 4 آنتی بیوتیک سیپروفلوکساسین، سفتازیدیم، جنتامایسن و ایمی¬پنم بدست آمد. ایزوله¬های مقاوم برای تشخیص فنوتیپی افلاکس به کمک یک مهارکننده افلاکس؛ مورد آزمون قرار گرفت. 10 ایزوله بدست آمده جهت آزمون semi-quantitative rt-pcr استفاده گردید. rna 10 ایزوله استخراج شده و آزمون rt-pcr صورت پذیرفت و با مقایسه دانسیتومتری شدت جذب و منحنی استاندارد، بیان بیشینه پمپ¬های افلاکس شناسایی گردید. سپسgenomic dna استخراج شده، واکنش pcr ژن¬های توپوایزومرازی برای10 ایزوله¬ مقاوم انجام شد و سپس محصولات تعیین توالی نوکلئوتیدی گردید. آزمون دیسک دیفیوژن نشان دهنده مقادیرمقاومت: سفتازیدیم 65%، ایمی¬پنم 33%، سیپروفلوکساسین 35%، جنتامیسین 65%، آمیکاسین 43%، توبرامایسن 50%، تیکارسیلین 45%، پیپراسیلین 35%، آزترونام 49% و سفوتاکسیم 75% بود. در روش آگار دایلوشن مقادیر مقاومت: سفتازیدیم 67%، ایمی پنم32%، سیپروفلوکساسین 34% و جنتامیسین 62% حاصل شد. بررسی فنوتیپی ایزوله¬های مقاوم به سیپروفلوکساسین با مهارکننده، به جداسازی 10(10/45) ایزوله (%22) با الگوی مقاومتی گوناگون انجامید. آزمون rt-pcr نشانگر بیان پمپ mexef-oprn در %30 (3/10)، پمپ mexcd-oprj در % 50 (5/10) و پمپ mexxy-oprm در %70(7/10)از ایزوله¬ها بود. در هیچ یک از ایزوله¬ها، بیان بیشینه پمپ mexab-oprm مشاهده نشد. تعیین توالی ناحیه مقاومت کینولونی توپوایزومرازی نشانگر موتاسیون در ژن gyra در 10 ایزوله در نوکلئوتید 249 و تبدیل اسید آمینه ترئونین به ایزولوسین بود. در سایر ژن¬ها، با مقایسه توالی ناحیه مقاومت با توالی¬های بانک ژنی، موتاسیونی مشاهده نگردید.